Ocena czyszczenia i dezynfekcji ciężarówek: walidacja mikrobiologiczna i wykrywanie ATP

Po ocenie wizualnej, omówionej w poprzednim artykule z tej serii artykułów poświęconych bezpieczeństwu biologicznemu w transporcie zwierząt, kontynuujemy ocenę mikrobiologiczną tego procesu.

Ocena mikrobiologiczna

System ten służy do oceny procedury czyszczenia i dezynfekcji pojazdów, ale nie do szybkiego oceny stanu ciężarówki przed załadunkiem; główną kwestią jest czas potrzebny na uzyskanie informacji (inkubacja próbki i wyniki 48-72 h). W tym czasie ciężarówka z pewnością dostarczy już ładunek.

W walidacji mikrobiologicznej głównym celem jest wykrycie enterobakterii (bakterii typu Gram w składzie mikrobioty jelitowej). Te enterobakterie wskazują na obecność lub brak materii organicznej po czyszczeniu i dezynfekcji pojazdu. Metodę tę stosuje się zamiast specyficznych reakcji PCR dla patogenów świń (PRRS, PED itp.), PCR wskaże tylko obecność materiału genetycznego, ale nie określi, czy patogen jest żywotny i zdolny do zakażenia.

W przypadku kontroli mikrobiologicznej pojazdu transportowego ważna jest standaryzacja pobierania próbek (co zawsze powinno odbywać się w ten sam sposób). Można to zrobić za pomocą wymazówek lub płytek RODAC®, ale ze względu na wielkość powierzchni w przyczepie najlepiej jest zwiększyć powierzchnię próbki za pomocą specjalnych chusteczek lub gąbek (Chiffonettes® / Sodi-box®) (Zdjęcie 1). Zwykle pobiera się dwie próbki z podłogi przyczepy i jedną z windy załadowczej, jedną z kabiny i jedną ze skrzynek bocznych (Zdjęcie 2). Oznacza to, że pobieranych jest od 7 do 9 próbek na pojazd (w zależności od liczby pokładów przyczepy). Z każdego punktu należy zawsze pobierać próbki z tej samej powierzchni (cm²), a wielkość tego obszaru należy zgłaszać do laboratorium, aby otrzymać wyniki w CFU / cm².

Ocena wyników: nie jest określone, jakie jest prawidłowe stężenie enterobakterii, aby uznać pojazd transportowy za „odpowiedni” lub „nieodpowiedni” dla załadunku zwierząt. Istnieją jednak odniesienia dotyczące przemysłu spożywczego: obszar jest uważany za „odpowiedni”, jeśli zawiera 0–10 enterobakterii / cm². Od tego punktu odniesienia każda firma musi określić własny akceptowalny punkt odcięcia.

Wykrywanie trójfosforanu adenozyny (ATP)

Ze względu na ograniczenie czasu wymaganego do uzyskania wyników z hodowli mikrobiologicznych, na rynku dostępne są inne narzędzia walidacji czyszczenia i dezynfekcji pochodzące z przemysłu spożywczego, które można zastosować w przypadku transportu trzody chlewnej w połączeniu z mikrobiologią. Jednym z tych narzędzi jest wykrywanie trifosforanu adenozyny (ATP). ATP to składnik obecny w kale, pozostałościach organicznych, żywności, bakteriach, pierwotniakach, pasożytach, drożdżach i grzybach. Jednak nie jest przydatny do wykrywania wirusów. W przemyśle spożywczym wykrywanie ATP na powierzchniach roboczych jest wykorzystywane jako kontrola jakości czyszczenia i dezynfekcji. Jest to szybki test (wyniki w sekundach) i łatwy w użyciu dla pracowników, ale należy zachować ostrożność przy interpretacji wyników, ponieważ jest to bardzo czuły test. Próbki transportowe pobiera się w wyżej wymienionych punktach kontrolnych (Zdjęcie 2), ale za pomocą wacika zawierającego środek zwilżający i enzym lucyferazę (aktywowany przez obecność ATP). W każdym punkcie kontrolnym pobiera się próbki z obszaru 10 cm X 10 cm. Za pomocą luminometru (Zdjęcie 3) odczytuje się bioluminescencję wymazu, a wyniki uzyskuje się w RLU (Relative Light Units).

Ocena wyników: podobnie jak w przypadku testu mikrobiologicznego, należy ustalić limity krytyczne, aby oszacować, które wartości można uznać za odpowiednie. W przemyśle spożywczym wartości te mogą się różnić w zależności od badanej powierzchni i wytwarzanego produktu. W badaniu w Kanadzie oceniono skuteczność protokołu czyszczenia i dezynfekcji pojazdów do transportu świń metodą bioluminescencji ATP i ustalono następujące wartości krytyczne: odpowiednie- poniżej 430 RLU / 100 cm²; ryzyko zanieczyszczenia- między 430 a 850 RLU / 100 cm²; i wysokie ryzyko- przy wartościach powyżej 850 RLU / 100 cm² (te wartości są tylko przykładami).

Oceniając wyniki, próbki należy pobierać w myjni po oczyszczeniu i dezynfekcji, ponieważ, jak wspomniano powyżej, jest to bardzo wrażliwa metoda, a zanieczyszczenie środowiskowe może zwiększyć wartości dodatnie.

Luminometr wymaga początkowej inwestycji, ale koszt każdej próbki nie jest wysoki (ok. 2 euro / wymaz). Zaleca się ponowne kalibrację czytnika (próbkę kalibracyjną można pobrać, pobierając wymaz z wnętrza jałowej strzykawki lub sterylnej probówki typu „vacutainer®”).

Branża trzody chlewnej jest coraz bardziej świadoma potrzeby istnienia protokołów dotyczących różnych procedur, które przeprowadzamy na farmach i podczas transportu zwierząt, i że protokoły te muszą być sporządzone na piśmie. Jednak czasami zapominamy o ostatnim i najważniejszym kroku, walidacji protokołu, aby wiedzieć, czy naprawdę działa (lub innymi słowy, kontrola jakości).