0
Obecnie nie ma dostępnych szczepionek zapobiegających ASFV, a kontrola epidemii często polega na kwarantannie i usuwaniu zakażonych i narażonych na zakażenie zwierząt z ognisk choroby. Do tej pory skuteczne wykrywanie żywego wirusa afrykańskiego pomoru świń (ASFV) wymagało pobrania krwi od żywej świni do każdego testu diagnostycznego. Przedstawiamy nowy sposób wykrywania obecności żywego ASFV, który minimalizuje zapotrzebowanie na próbki od żywych zwierząt i zapewnia łatwiejszy dostęp do laboratoriów weterynaryjnych, które mogą zdiagnozować wirusa. Rt-PCR lub ilościowa PCR (qPCR) to dobrze ugruntowana metoda wykrywania i oznaczania ilościowego dużych ilości próbek klinicznych ASFV w terenie. Istnieją również testy do wykrywania przeciwciał, które mają odczyt kolorymetryczny, ale produkcja przeciwciał następuje co najmniej kilka dni po zakażeniu ASFV. W diagnostyce ASFV, pozytywny wynik rt-PCR nadal wymagałby potwierdzenia izolacją wirusa, zanim zostanie uznany za pozytywną próbkę. Dotychczas jedynym dostępnym typem komórek na których wykonuje się takie izolacje w celu potwierdzenia wyniku rt-PCR, były pierwotne makrofagi świń.
Odnotowaliśmy, że komórki MA-104 mogą być użyte do badania obecności zakaźnego ASFV, z czułością o około jeden log mniej niż makrofagi świń, ale z czułością większą o około jeden log niż w przypadku rt-PCR. MA-104 to dostępna na rynku linia komórkowa wyizolowana z komórek nabłonka nerek Cercopithecus aethiops, powszechnie stosowana do diagnostyki PRRS i do produkcji małpich rotawirusów. Komórki MA-104 mają czas podwajania wynoszący 72 godziny, nie mają żadnych specjalnych wymagań dotyczących pożywek i można je łatwo zamrozić, co jest niezbędne w sytuacjach epidemii, gdy duża liczba próbek klinicznych może wymagać przebadania w celu ustalenia, czy zawierają zakaźnego wirus ASF lub po prostu DNA ASFV. Ponadto zdolność komórek MA-104 do tworzenia wyraźnej hemadsorpcji (HA) pomoże w szybkiej diagnostyce ASFV. W przypadku braku źródła krwinek czerwonych, komórki MA-104 można wyraźnie zabarwić pod kątem obecności ASFV przy użyciu przeciwciał anty-ASFV, co jest również przydatne do potwierdzenia obecności ASFV w niektórych naturalnych izolatach, które mogą nie tworzyć HA z powodu mutacji w CD2. To wyraźne zabarwienie komórek zakażonych ASFV jest zaletą w porównaniu ze stosowaniem makrofagów świńskich jako substratu, ponieważ makrofagi świń mają aktywność peroksydazy, co skutkuje wysokim tłem w niezainfekowanych komórkach, zwiększając możliwość pominięcia wyniku dodatniego lub potwierdzenia wyniku fałszywie dodatniego .
Wstępne badania wykazały, że byliśmy w stanie wyizolować ASFV z zakażonych próbek krwi, co wskazuje, że MA-104 jest dobrym substratem do bezpośredniej izolacji z próbek terenowych.
Rai A, Pruitt S, Ramirez-Medina E, Vuono EA, Silva E, Velazquez-Salinas L, Carrillo C, Borca MV, Gladue DP. Identification of a Continuously Stable and Commercially Available Cell Line for the Identification of Infectious African Swine Fever Virus in Clinical Samples. Viruses. 2020; 12(8): 820. https://doi.org/10.3390/v12080820
