0
Klasyczny pomór świń (CSF) wywołany przez wirusa klasycznego pomoru świń (CSFV) jest jedną z najbardziej szkodliwych chorób i prowadzi do znacznych strat gospodarczych w przemyśle trzody chlewnej. Pomimo wysiłków wielu władz mających na celu wyeliminowanie choroby z krajowych populacji świń, choroba ta jest nadal powszechna.
W tym przypadku wybrano antywirusowe małe RNA o strukturze spinki do włosów (shRNA), a następnie wstawiono je do lokus Rosa26 (pRosa26) za pomocą strategii knock-in za pośrednictwem CRISPR / Cas9. Wreszcie, transgeniczne świnie (TG) anty-CSFV wytworzono za pomocą somatycznego transferu jądrowego (SCNT).
Postanowiliśmy przeprowadzić eksperymenty na zwierzętach zakażanych "przez kontakt". Następnie wszystkie świnie zostały losowo podzielone do dwóch oddzielnych pomieszczeń. W każdym pomieszczeniu znajdowała się jedna świnia non-TG, wykorzystana do zakażenia CSFV (NTG-In), trzy świnie NTG i trzy świnie TG. Po trzech dniach aklimatyzacji, świnie NTG-In poddano zakażeniu CSFV przez iniekcję domięśniową, podczas gdy pozostałe świnie nie zostały zakażone, aby można było naśladować naturalne rozprzestrzenianie się CSFV przez kohabitację. W trakcie zakażenia kliniczne objawy związane z CSFV (w tym letarg i krwawienie), śmiertelność i wiremię u zakażonych świń były monitorowane i rejestrowane codziennie. Wyniki wykazały, że wszystkie świnie NTG rozwinęły typowe objawy infekcji CSFV, ze wskaźnikiem śmiertelności wynoszącym 100%. Chociaż objawy kliniczne związane z CSFV obserwowano również u świń z TG, objawy te nie były poważne, a poziomy wirusa we krwi były niższe u świń TG niż u świń NTG.
Dalsze testy prowokacji wirusowej in vitro i in vivo wykazały, że świnie TG mogą skutecznie ograniczać replikację CSFV, zmniejszać objawy kliniczne i śmiertelność związane z CSFV, a odporność na choroby może być stabilnie przenoszona do pokolenia F1.
Podsumowując, nasza praca wykazała, że technologia interferencji RNA (RNAi) łącząca technologię CRISPR / Cas9 dała możliwość produkcji zwierząt TG o zwiększonej odporności na infekcje wirusowe.
Zastosowanie świń TG może zmniejszyć straty ekonomiczne związane z CSF, a ta strategia antywirusowa może być przydatna w przyszłych badaniach antywirusowych.
Xie Z, Pang D, Yuan H, Jiao H, Lu C, Wang K, et al. (2018) Genetically modified pigs are protected from classical swine fever virus. PLoS Pathog 14(12): e1007193. https://doi.org/10.1371/journal.ppat.1007193